正如前一节指出的，研究表明，泌乳动物用于生长和乳蛋白合成的总NEAA的需要量会在对限制性最大的EAA需要量满足之前得到满足。如果确实如此，则可推出这样的结论，即：MP用于蛋白质合成的效率将取决于MP中EAA的比例与动物需要比例的匹配程度以及MP中EAA的总量。这一逻辑使得人们对奶牛在饲喂不同组成饲粮情况下的限制性氨基酸的鉴别产生兴趣。饲粮组成成分如何影响氨基酸的限制性大小顺序的知识，对于选择蛋白质补充料来改善MP中氨基酸的比例是非常有用的。同样，对已知组分饲粮的第一限制性EAA的了解，是从事氨基酸需要量测定研究不可缺少的信息。JQS牛农宝 绝大多数的鉴别工作表明，Lys和Met是奶牛MP中第一限制性EAA。关于其限制性的最直接的证据来自如下研究：通过皱胃或十二指肠灌注单个或一定组合的EAA，然后测定其对氮沉积和乳蛋白合成的影响。饲喂瘤胃保护性Met(RPMet)和瘤胃保护性Lys(RPLys)等过瘤胃AA，并测定对生长牛增重及对产奶牛乳蛋白合成的影响，进一步证实和拓展了灌注试验的研究结果。利用食管沟反射性闭合的生理反应，同样为输送氨基酸到断奶犊牛的小肠提供了一种手段(Abe等，1997，1998)。JQS牛农宝 应用上述方法证明，Met和Lys的限制性顺序取决于二者在RUP中的相对含量。例如，当用玉米或玉米来源的饲料提供饲粮中大部分或全部RUP时，Lys被确定是断奶犊牛(Abe等，1997)、生长牛(Abe等，1997;Burris等，1976;Hill等，1980)和泌乳牛(King等，1991;Polan等，1991;Schwab等，1992a)的第一限制性氨基酸。与此相反，当只饲喂少量玉米时，或饲喂粗饲料水平高的饲粮时，或大部分RUP补充料由大豆产品、动物性蛋白质或二者之组合来提供时，Met被认为是断奶犊牛(Donabue等，1985;Schwab等，1982)、生长牛(Hopkins等，1999;Klemesrud和Klopfenstein，1994;Lusby，1994;Robert等，1999)和泌乳牛(如，Armentano等，1997;RulquinDela-by，1997;Robert等，1994;Schingoethe等，1988)的第一限制性氨基酸。与瘤胃细菌的AA含量相比，玉米来源饲料的Lys含量偏低，Met的含量与之相似，而大豆产品及大多数动物性蛋白质的Lys含量与之相近，Met的含量偏低(表5-10)。当产奶牛饲喂不含(Schwab等，1976)或含少量(Rulquin，1987)蛋白质补充料时，Lys和Met为共同限制性氨基酸。JQS牛农宝 对于生长和乳蛋白合成而言，Lys和Met可能是2种首要的限制性EAA。首先，对生长牛的氮沉积而言，Met是微生物粗蛋白中的第一限制性氨基酸(Richardson和Hatfield，1978;Titge-meyer和Merchen，1990b)，而Lys为第二限制性氨基酸(Richardson和Hatfield，1978)。其次，与微生物粗蛋白相比，大多数饲料的总EAA中Lys和Met含量较低，特别是Lys(表10)。最后，在机体瘦肉组织和牛乳中Lys和Met在总EAA中的比例相似(表10)。JQS牛农宝 生长牛对提高MP中Lys和Met供应量的反应包括体增重和饲料转化效率不同程度地提高(Hopkins等，1999;Robert等，1999;Veira等，1991)及排泄尿氮不同程度地减少(Abe等，1997，1998;Campbell等，1996，1997;Donahue等，1985;Schwab等，1982)。产奶牛对提高MP中Lys和Met供应量的生产反应包括乳蛋白的含量及产量、产奶量和采食量不同程度地增加。关于产奶牛对过瘤胃Lys和Met的反应已有文献进行过综述(Rulquin和Verite，1993;Schwab，1995b，1996a;Garthwaite等，1998)。总体上，这些综述及其他最近的报道(Piepenbrink等，1999;Nocek等，1999;Sniffen等，1999a，1999b;Freeden等，1999;Rode等，1999;Wu等，1999;Nichols等，1998;Rulquin和Delaby，1997)均表明：①乳蛋白含量比产奶量对补充Lys和Met的反应更敏感，尤其是产奶高峰以后的奶牛;②乳蛋白百分含量的增加与产奶量无关;③酪蛋白是乳蛋白中最受影响的部分;④当MP中的其他AA达到或接近估测的需要量时，乳蛋白增加对添加的Lys或Met的反应最敏感(Rulquin等，1993;Schwab，1996a;Sloan等，1998);⑤在产奶量方面，泌乳早期的奶中期或晚期奶牛对Lys和Met的反应更敏感;⑥在饲粮干物质粗蛋白水平接近正常水平(14%～18%)的条件下，与低于或高于正常水平条件相比，生产性能对MP中Lvs和Met供应量增加的反应更大，更具代表性。Chapoutot等(1992)证明，产奶高峰后的奶牛其乳蛋白百分含量比产奶量对MP中Lys和Met浓度的提高更加敏感。作者采用多重反转试验测定了40头产奶高峰后期奶牛对瘤胃保护性Lys和Met的个体反应。瘤胃保护性氨基酸混合物按提供可消化Lys23g/d和可消化Met 7g/d的量来饲喂。他们发现，有37头奶牛的反应是乳蛋白含量增高，有31头奶牛的反应是乳蛋白产量增加，而有16头奶牛的反应是产奶量升高。