羊的人工授精技术(二)
一、液态稀释配方与配制1.低倍稀释的稀释液,在采出后,原精数量不够时,可作低倍稀释,密度仪器测定。满足需要,并在短时间内使用,稀释液配方可简单些。如生理盐水;奶类稀释液:用鲜牛、羊奶,水浴92℃~95℃消毒15分钟,冷却奶皮后即可使用。凡用于高倍稀释的稀释液,都可作低倍稀释用。2.高倍稀释的稀释液,不但是为了扩大量,而要延长精子的保存时间,配方很多,现介绍2个稀释液。(1)葡萄糖3克,柠蒙酸钠1.4克,EDTA(乙二胺四乙酸二钠)0.4克,加蒸馏水至100毫升,溶解后水浴煮沸消毒20分钟,冷却后加青霉素10万单位,链霉素0.1克,若再加10~20毫升卵黄,可延长精子存活时间。(2)葡萄糖5.2克、乳糖2.0克、柠檬酸钠0.3克,EDTA0.07克,三墓0.05克,蒸馏水100毫升,溶解后煮沸消毒20分钟,冷却后加庞庆大霉素1万单位,卵黄5毫升。
二、液态稀释原活率在0.6以上万可用于稀释输精。1.低倍稀释,原量够输精时,可不必再稀释,可以直接用原精直接输精。不够时按需要量作1∶2~4倍稀释,要把稀释液加温到30℃,再把它缓慢加到原中,摇匀后即可使用。2.高倍稀释,要以精子数、输精剂量、每一剂量中含有1000万个前进运动精子数,结合下午最后输精时间的精子活率,来计算出稀释比例,在30℃下稀释(方法同前)。
三、分装、保存和运输低倍稀释,就近输精,把它放在小瓶内,不需降温保存,短时间用毕。1.分装保存(1)小瓶中保存;把高倍稀释清液,按需要量(数个输精剂量装入小瓶,盖好盖,用蜡封口,包裹纱布,套上塑料袋,放在装有冰块的保温瓶(或保存箱)中保存,保存温度为0℃~5℃。(2)塑料管中保存:作者等把以1∶40倍稀释,以0.5毫升为一个输精剂量,注入饮料塑料吸管内(剪成20厘米长,紫外线消毒),两端用塑料封口机封口,保存在自制的泡沫塑料的保存箱内(底放冻好的冰袋,再放泡沫塑料隔板,把管用纱布包好,放在隔板上面,固定好)盖上盖子,保存温度大多在4℃~7℃,最高到9℃。保存10小时内使用,这种方法,可不用输精器了,经济实用。2.运输不论那种包装,必须固定好,尽可能减轻振动。若用摩托车送,要把箱(或保温瓶)放在背包中,背在身上。若乘汽车送,最好把它抱在身上。
四、冷冻制作技术制作冷冻,要有很多设备,好在各省、区都有冷冻站,可用它来兼冻波尔山羊,不需增加设备,有的站已经开始冷冻波尔山羊,并取得较好的效果。作者等研究成功的80年代在北京市门头沟区冷冻绒山羊,获得情期受胎率73%的好结果,现介绍给大家,供参考。1.稀释液配方与配制Ⅰ液葡萄糖3克、柠檬酸钠3克,加蒸馏水至100毫升,溶解后,水浴煮沸消毒20分钟,冷却后加青霉素10万单位,链霉素0.1克,取80毫升加卵黄20毫升。Ⅱ液取Ⅰ液44毫升,加6毫升。2.冷冻制作采出的,检查活率在0.6以上者即可冷冻,在30℃下用Ⅰ液(30℃)进行1∶1.5倍稀释,包上8层纱布放在4℃冰箱中预冷降温2~小时,在4℃下加与Ⅰ液等量的含的Ⅱ液,摇匀,最终稀释比例为1∶3倍稀释,立即在氟板上滴冻成0.1毫升的颗粒。取本稀释液Ⅰ液94毫升,加6毫升,合成一液,就可以冷冻细管。
五、母羊发情鉴定1.以母羊发情外部表现来判断母羊发情本地母山羊发情外部表现较明显,发情时发出叫声,食欲减退,兴奋不安,对外界刺激反应敏感,摇头摆尾,有交配欲,喜欢接近公羊,在公羊追赶爬跨时常站立不动,让公羊交配;肿大,流出粘液。从母羊发情的外部表现来判断母羊是否发情是比较容易的。但养羊户往往不注意,就不能确知母羊的发情开始时间,给适时输精造成困难。2.试精用试精公羊试情,能准确找出发情母羊,做到适时输精。最简便的方法是,在试情前将公羊腹部带兜上试情布(长40~45厘米,宽35~40厘米,四角缝上25~30厘米长的带子),每日早晨一次或早晚各一次将公羊放入母羊群中试情。当母羊接受公羊爬跨,站立不动,或母羊围着公羊旋转,并不断摇尾,都是母羊发情的表现,及时把它抓出,待配。3.试情公羊选择和饲养管理试情公羊必须选择体质结实、健康无病,性欲旺盛,动作灵敏的1~5岁公羊。试情公羊与母羊的比例以1∶30~40为宜。在配种前一个月驱虫,加强饲养管理,除放牧采食或舍饲喂草外,每天补饲0.2~0.3公斤混合精料。每隔10~15天,给试情公羊排精一次,增强性欲。
六、输精1.输精时间适时输精,对提高母羊的受胎率十分重要。山羊的发情持续时间为24~48小时。排卵时间一般多在发情后期30~40小时。因此,比较适宜的输精时间应在发情中期后(即发情后12~16小时)。如以母羊外部表现来确定母羊发情的,若上午开始发情的母羊,下午与次日上午各输精1次;下午和傍晚开始发情的母羊,在次日上下午各输精1次。每天早晨1次试情的,可在上下午各输精1次。2次输精间隔8~10小时为好,至少不低于6小时。若每天早晚各1次试情的,其输精时间与以母羊外部表现来确定母羊发情相同。如母羊继续发情,可再行输精1次。2.母羊保定本文介绍一种不需输精架的倒立保定法,它没有场地限制,任何地方都可输精。保定人将母羊头夹紧在两腿之间,两手抓住母羊后腿,将其提到腹部,保定好不让羊动,母羊成倒立状。用温布把母羊外阴部擦干净,即待输精。3.输精方法(1)子宫颈口内输精:将经消毒后在1%氯化钠溶液浸涮过的开膣器装上照明灯(可自制),轻缓地插入,打开,找到子宫颈口,将吸有的输精器通过开膣器插入子宫颈口内,深度约1厘米左右。稍退开膣器,输入,先把输精器退出,后退出开膣器。进行下只羊输精时,把开膣器放在清水中,用布洗去粘在上面的粘液和污物,擦干后再在1%氯化钠溶液浸涮过;用生理盐水棉球或稀释液棉球,将输精器上粘的粘液,污物自口向后擦去。(2)阴输精:将装有的塑料管从保存箱中取出(需多少支取多少支,余下仍盖好),放在室温中升温2~3分钟后,将管子的一端封口剪开,挤1小滴镜检活率合格后,将剪开的一端从母羊向深部缓慢插入,到有阻力时停止,再剪去上端封口,自然流入底部,拔出管子,把母羊轻轻放下,输精完毕,再进行下只母羊输精。装在小瓶中保存的高倍稀释,要用输精器吸入后再输精(余下仍在0~5℃下保存),可作子宫颈口内或输精。液态情期受胎率方,80%以上。有人做过试验,输精的情期受胎率比子宫颈口内输精的降低不到2%。所以说情期液态可以输精,而且塑料管又可代替输精器,便于推广应用。冷冻必须进行子宫颈口内输精,否则会降低受胎率。有条件用腹腔镜子宫角内输精,能使冷冻受胎率提高。4.输精量原精输精每只羊每次输精0.05~0.1毫升,低倍稀释为0.1~0.2毫升,高倍稀释为0.2~0.5毫升,冷冻为0.2毫升以上。5.冷冻解冻解冻好坏对解冻后活率有很大影响。本人采用40℃水温解冻颗粒,先把小试管用维生素B12(每支含0.5毫克)冲洗一下,留一点B12,并快速在40℃水中摇动至2/3融化,取出试管继续速摇至全部融,解冻后活率较好,可试试。另外,建议做一个泡沫塑料小盒,倒上液氮,再把冷冻袋放入氮液中,这样可避免未解冻的颗粒,因升温又入液氮降温,影响活率。
七、所需器材、药品、用品、表格1.所需器材、药品、用品所需物品大部分已在文章中提到了。用于配制稀释液的药品、试剂:如葡萄糖要一水的、柠檬酸钠、EDTA(乙二胺四乙酸二钠)都要分析纯的,青、链霉素不要过期的,卵黄需新鲜鸡蛋,要用不加水的鲜奶。假内胎,玻璃器皿易破损的物品要多准备一些。显微镜保温箱、开膣器照明灯、保存箱等能自己做的尽可能自己做,在实践中要有所创新。如要开展冷冻输精,要配备好液氮罐。2.表格有种公羊品质检查表;母羊配种记录表;使用登记表,及日常事务记录等,各项记录必须按时、准确填写。是为了统计分析,总结经验,改进工作。十一、建立人工授精站和输精点地处平川的,可象江苏省海门市那样全市就改良站制作高倍稀释,负责统一供精,每个镇兽医站设一个输精点,负责农户母羊输精。地处山区的,可划片建立人工授精站,全县可建2~3个人工授精站,在乡镇或母羊多的村设输精点。若采用冷冻输精,县里又无冷冻设备,人工授精站可统一购买冷冻,转给各乡镇输精点,每点配备液氮罐,由人工授精站定期到各输精点添加液氮。有条件地地方也可购置冷冻设备,饲养波尔山羊公羊,自己制作冷冻,也是可以的。但不能提倡,因为我国现有冷冻设备,已够用的了。还可在配种季节,季节性的集中母羊,建立短期的人工授精站,采用鲜精或低倍稀释输精,到配种季节末结束。各地可根据具体情况,采用、创新。1.建立人工授精站的条件和基本建设人工授精站应建立在背风、向阳、干燥、有水源、牧草地面积大或有较多的农田,无疾病流行史,交通便,母羊数量多,又是一县的中心地带,这样便于每天送或取,因为高倍稀释,当天只能当天使用,第二天使用就要降低受胎率,就得天天取送,设在边远地区就不方便了。人工授精站设有:采精室(兼作输精室)、处理室(要有顶棚)、公羊圈舍、母羊圈、饲料间、兽医室、工作人员宿舍等。2.建立输精点的条件设在母羊较集中,交通较方便的地方,把点设在乡、镇兽医站也可以,不论是用摩托车还是乘公共汽车取或送,在上午10时前必须到各输精点,这样单程不能超过2小时,山区最远点距人工授精站20~30公里,平川可远到50公里以外。各地可根据当地的具体条件来建点。